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编号:10251944
中药更年平调冲剂对“更年期大鼠”骨质疏松的作用
http://www.100md.com 《广州中医药大学学报》 1999年第2期
     作者:潘习龙 程化奇 殷新猷 鲁遂荣

    单位:潘习龙 广州中医药大学 97 级博士生,广州 510405;程化奇 殷新猷 鲁遂荣 湖北医科大学第二附属医院中医科,武汉 430070

    关键词:骨质疏松;绝经后;中药疗法;@更年平调冲剂;治疗应用;补肾填精;骨密度;药物作用;钙;尿;钙;血液;钙;分析

    广州中医药大学学报990218 摘要:为探索中药对女性更年期骨质疏松的防治作用,设计了以滋肝补肾填精的中药复方更年平调冲剂作用于“更年期大鼠”(简称“更年鼠”)的试验。方法是:选用 10~15 月龄 SD 大鼠 48 只,随机分为 6 组:先以低钙饲料喂饲和切除双侧卵巢方法制备“更年鼠”模型,再分别以更年平调冲剂大、中、小剂量,中药阳性对照药更年安和西药阳性对照药己烯雌酚对其治疗,并分别与模型组及 3 月龄雌性青年大鼠组(8只)相对照,观察更年平调冲剂对“更年鼠”骨质疏松的防治作用。结果表明:更年平调冲剂的大、中剂量组可令“更年鼠”血钙升高(与模型组比较P<0.01),并使其骨密度、髓质密度、骨小梁计数等指标均有不同程度的改善,与己烯雌酚作用相仿。提示:更年平调冲剂对“更年鼠”骨质疏松有较好的防治作用。
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    中图分类号:R681

    文献标识码:A

    文章编号:1007-3213(1999)02-0141-04

    Effect of Gengnian Pingtiao Granule for Postmenopausal Osteoporosis in Rats

    PAN Xilong1, CHENG Huaqi2, YIN Xinyou2, LU Suirong2

    (1.Doctor Class of Grade 97,Guangzhou University of TCM, Guangzhou 510405,China;
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    2.Dept.of TCM,the Second Affiliated Hospital of Hubei Medical University,Wuhan 430070,China)

    Abstract To study the effect of Gengnian Pingtiao Granule (GPG) on postmenopausal osteoporosis, 48 ovariectomized rats were allocated to 6 groups: model group, three GPG groups (high, moderate and low dosages respectively), Gengnian An Tablet group and stilbestrol group. Other 8 rats of 3 months old served as youth control group. The results showed that serum calcium in GPG groups with high and moderate dosages was markedly increased(P<0.01),and bone mineral density,bone marrow density and bone trabecula count were improved to some extent as compared with the model group .The above effects of GPG were as the same as stilbestrol.It is indicated that GPG exerts a certain effect on postmenopausal osteoporosis.
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    Key words OSTEOPOROSIS,POSTMENOPAUSAL/TCD ther.; @GENGNIAN PINGTIAO GRANULE/ ther.use;

    REINFORCING KIDNEY SU EMISSINON; BONE DENSITY/drug eff.;

    CALCIUM/urine; CALCIUM/blood; CALCIUM/analysis

    妇女更年期骨质疏松及骨质疏松导致骨折的防治问题越来越引起人们的重视,我国学者调查上海地区 1 万多名 60 岁以上的居民骨折的发生率为 9.6%(男、女分别为5.5%、12.7%)[1]。以往的实验已经证实,具有滋肝补肾填精功效的更年平调冲剂能够有效地改善“更年期大鼠”(简称“更年鼠”)卵巢功能,调节性激素水平。而性激素改变是导致骨质疏松的主要原因。因此,本实验在原有实验的基础上[2~4],通过对大鼠血钙、尿钙、血磷、骨密度、骨钙含量、骨小梁计数等指标测定,以探讨该方对骨质疏松的防治作用。
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    1 材料

    1.1 动物 选 10~15 月龄 SD 大鼠 48 只,雌性,体重 (267±24) g,湖北医科大学动物中心提供,按大鼠动情周期检查方法[5],阴道脱落细胞涂片,以 95% 酒精固定,巴氏染色,如 SD 大鼠无周期性动情变化,则确定为“更年鼠”。选 3 月龄 SD 大鼠 8 只,雌性,体重 (194±17)g,湖北医科大学动物中心提供,为青年对照组。

    1.2 药品 更年平调冲剂由何首乌、枸杞子、牛膝等 12 味中药组成,由本院药厂配制成 2.25kg/L、1.5kg/L、0.75kg/L的大、中、小剂量组;己烯雌酚为广州侨光制药厂产品,批号 920103,配制成 2.17% 混悬液;更年安片为天津药仁堂制药厂产品,批号 930550,配制成 4.5% 混悬液。

    1.3 试剂 磷试剂:上海长征生物科技公司,批号:50589;钙试剂:波音特生物科技有限公司,批号:5156。
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    1.4 仪器与设备 美国 RA-100 型全自动生化分析仪;日本岛津 ID150L-3 X 光摄像机;上海产 LGS-4-1 型马福炉;西德产 IBAS 图像分析仪;日本产 Olympus 光学显微镜。

    2 方法

    2.1 造模方法 本实验用低钙饲料,自来水饮用,摘除大鼠双侧卵巢(均经组织学验证为卵巢)的方法制作“更年鼠”骨质疏松模型[6]。去势 2 周后进行实验。

    2.2 分组和给药方法 将 48只 SD 大鼠随机分为 6 组,每组 8 只,分为更年平调冲剂大、中、小剂量组、更年安组、己烯雌酚组、模型组。①更年平调冲剂大、中、小剂量组分别给予2.25kg/L、1.5kg/L、0.75kg/L更年平调冲剂按 20mL/kg 灌胃,1次/d,持续 8 周;②更年安组给予 4.5%更年安混悬液20mL/kg ,用法同①;③己烯雌酚组给予 2.17% 己烯雌酚混悬液20mL/kg,用法同①上;④模型组给予 0.9%生理盐水20mL/kg, 用法同①;⑤青年组给予 0.9%生理盐水20mL/kg,用法同①。
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    灌胃结束后,收集每只SD大鼠24h尿液,眼眶取血,取双侧股骨,用于各指标之检测。

    2.3 观测指标

    2.3.1 尿钙(c尿钙)检测 灌胃结束后,收集每只大鼠24h尿液,用磷甲酚肽络合酮比色法测尿钙排泄量。

    2.3.2 血钙(c血钙)、血磷(c血磷)检测 灌胃结束后,以乙醚吸入麻醉,眼眶取血,分离血清,以磷甲酚肽络合酮比色法测血钙,以亚铁磷钼酸法测血磷。

    2.3.3 X 光片图像分析 取右侧股骨拍 X 光片(照射条件 50mA、42~44 kV、0.04s),然后用图像分析仪对 X 光片进行图像分析处理,检测指标包括:骨密度(w)、皮质密度(w皮质)、髓质密度(w髓质)[7]
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    2.3.4 股骨干重、灰重及骨钙含量检测右侧股骨用氯仿∶甲醇(2∶1)混合脱脂后,置于 120℃ 烘箱中干燥 6 h,测其干燥重,然后用高温炉(800℃)灰化 6 h 称灰重,再将灰粉溶于 6 mol/L 盐酸中,用间接滴定法测骨钙含量(c骨钙)。

    2.3.5 组织学检查 将剥离肌肉后的完整股骨置于 10% 甲醛溶液中,固定 48 h,切片,HE 染色,中性树脂封片,对股骨端股骨颈周围视野(共计 5 个视野)骨小梁个数计数 (n骨小梁)(即每两个接合点之间为一个骨小梁)。

    2.4 统计学处理 所有实验数据均以均数±标准差 (±s)表示,方差分析处理实验数据。

    3 结果

    结果见表1、表2。
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    4 讨论

    目前对于更年期骨质疏松症尚未有明确的诊断标准。1980 年 WHO 绝经研究科学小组建议,以相应性别的年轻健康成人作为正常骨密度的标准,骨密度与骨体积相比,若平均低于两个标准差以上,可诊断为骨质疏松症[8、9] 。1983 年第四届国际骨质疏松症研讨会将该病定为全身性骨病,特征为低骨量及骨组织细微结构的破坏,引起骨脆性及骨折率增加。

    本研究显示滋肝补肾填精的更年平调冲剂可令“更年鼠”的血钙升高,骨密度、髓质密度、骨小梁计数等指标得到改善。进一步证明中医“肾主骨”的理论精髓。

    有资料报道[10]:尿钙、血钙、血磷并不是衡量绝经妇女骨质疏松的特异性指标,检测结果可在正常范围内,本实验除增高血钙作用外,对尿钙、血磷无明显改变。有资料表明[11],更年期妇女骨丢失往往从骨髓开始,骨髓质丢失速度大大快于骨皮质,但骨皮质丢失持续时间更长。表 2 显示,与模型组比较,更年平调冲剂大、中剂量组的髓质密度升高均有统计学差异(P<0.05或P<0.01),并且各实验组骨钙含量均有不同程度的增加(P<0.05或P<0.01),表明更年平调冲剂能延缓“更年鼠”骨丢失,促进钙盐沉着。
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    本实验从骨小梁组织学切片还观察到,“更年鼠”与青年鼠比较,骨皮质变薄,表1 更年平调冲剂对“更年鼠”尿钙、血钙、血磷的影响 (±s) 组 别

    N/只

    c尿钙/(μmol.L-1)

    c血钙/(mmol.L-1)

    c血磷/(mmol.L-1)

    模型组

    8
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    23.7±10.0

    1.87±0.40

    1.86±0.17

    青年组

    7

    ——

    2.16±0.16*

    1.85±0.31

    大剂量

    8

    19.7±6.9

    2.29±0.16**
, 百拇医药
    1.55±0.32

    中剂量

    5

    22.9±6.8

    2.15±0.09*

    1.53±0.24

    小剂量

    8

    21.5±7.8

    2.05±0.01

    1.53±0.24

    更年安
, 百拇医药
    7

    21.1±4.8

    2.08±0.13*

    1.69±0.49

    己烯雌酚

    8

    22.6±4.9

    2.27±0.27**

    1.68±0.29

    *与模型组比较 P<0.05,**P<0.01(下同)表2 更年平调冲剂对“更年鼠”骨密度参数和骨小梁数、骨钙含量的作用 (±s) 组 别
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    N/只

    w骨密度/%

    w皮质密度/%

    w髓质密度/%

    n骨小梁/(个*视野-1)

    c骨钙/(mmol*L-1)

    模型组

    8

    0.34±0.03

    0.35±0.03
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    0.33±0.03

    9.30±0.28

    0.29±0.04

    青年组

    7

    0.41±0.02**

    0.42±0.04**

    0.40±0.03**

    19.97±0.67**

    0.35±0.07**

, 百拇医药     大剂量

    8

    0.37±0.03*

    0.38±0.02

    0.37±0.03**

    11.70±0.99*

    0.33±0.07*

    中剂量

    7

    0.36±0.03

    0.38±0.02
, 百拇医药
    0.36±0.03*

    10.80±1.02

    0.35±0.03**

    小剂量

    8

    0.36±0.03

    0.36±0.02

    0.35±0.03

    9.50±1.03

    0.33±0.01*

    更年安
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    7

    0.36±0.03

    0.37±0.04

    0.35±0.03

    9.60±0.78

    0.34±0.05*

    己烯雌酚

    6

    0.37±0.04

    0.38±0.04

    0.36±0.3*

    11.1±1.17*
, 百拇医药
    0.35±0.02**

    骨小梁变细、萎缩、甚则较大区域内骨小梁消失,周围覆盖的类骨质减少,髓腔明显扩大,而大、中剂量骨皮质较厚,骨小梁变粗,骨皮质周围覆盖的类骨质活跃。经治疗后股骨颈周围骨小梁计数大、中剂量组、己烯雌酚组均有改善(与模型组比较P<0.05或P<0.01)。

    综上所述,更年平调冲剂能一定程度阻止骨钙丢失,改善更年期妇女骨质疏松症,其中大剂量、中剂量组疗效较好,小剂量组疗效较差。

    作者简介:第一作者,男,博士生

    参考文献:

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    [4] 夏振信.更年平调液治疗更年期综合征心功能测定的变化[J].医学新知,1993,6:65

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    [9] 王博文.绝经和骨质疏松症[J].中国实用妇科与产科杂志,1995,1(11):43

    [10] Iwao,Yamazkai. Effect of 2 priflavone on osteoporosis[J].Life Sciences,1986,10(38):951

    [11] Brown JあP. Serum bone gal protein: a specific marker for bone formation in postmenopausal osteoporosis[J].Lancet, 1984,19:1091

    收稿日期:1998-03-23;, 百拇医药